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微生物法尼基焦磷酸合酶(FPS)ELISA試劑盒實驗使用說明書
BS-5186 微生物法尼基焦磷酸合酶(FPS)ELISA試劑盒
適用樣本:微生物培養(yǎng)上清液、細(xì)胞裂解液?
一、試劑盒組成?
組分名稱 規(guī)格(96T) 保存條件
預(yù)包被FPS抗體酶標(biāo)板 8×12孔 4℃避光
FPS標(biāo)準(zhǔn)品(凍干粉) 2管(100 ng/mL) -20℃長期保存
生物素化檢測抗體 120 μL -80℃避光
酶結(jié)合物(HRP標(biāo)記) 12 mL 4℃避光
TMB顯色底物(A/B液) 各6 mL 4℃避光
終止液(2M H?SO?) 12 mL 室溫
20×濃縮洗滌液 60 mL 室溫
二、實驗流程?
標(biāo)本制備?
微生物上清液:4℃、3000×g離心10分鐘,取上清檢測?。
細(xì)胞裂解液:加入RIPA裂解液,冰上裂解30分鐘后離心取上清。
試劑準(zhǔn)備?
洗滌液:1份濃縮液+19份蒸餾水稀釋?。
標(biāo)準(zhǔn)品梯度:用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液配制0.156-10 ng/mL系列濃度?。
檢測步驟?
加樣?:每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品/樣本,37℃孵育90分鐘。
洗滌?:洗板3次,每次浸泡1分鐘?。
加抗體?:每孔加入100μL生物素化抗體,37℃孵育60分鐘。
加酶結(jié)合物?:每孔加入100μL HRP標(biāo)記物,37℃避光孵育30分鐘。
顯色?:每孔加入90μL TMB底物,避光反應(yīng)15分鐘?。
終止?:每孔加入50μL終止液,振蕩混勻。
結(jié)果分析?
酶標(biāo)儀450nm讀取OD值,標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合計算樣本濃度?。
三、注意事項?
避免反復(fù)凍融樣本,分裝后-80℃保存?。
顯色反應(yīng)需避光,終止后30分鐘內(nèi)讀數(shù)?。
本試劑盒最小檢測限:0.05 ng/mL(參考標(biāo)準(zhǔn)曲線)?。
四、常見問題?
高背景值?:洗滌不凈或孵育時間過長。
標(biāo)準(zhǔn)曲線異常?:標(biāo)準(zhǔn)品稀釋誤差或板孔污染。
注:以上資料僅供參考,不作為實驗依據(jù),具體產(chǎn)品說明請咨詢品牌供應(yīng)商或技術(shù)老師。
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