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植物達(dá)瑪烷二醇合酶(DS)ELISA試劑盒實驗使用說明書
發(fā)布時間:2025/9/5瀏覽:94次
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  植物達(dá)瑪烷二醇合酶(DS)ELISA試劑盒實驗使用說明書

  BS-258251-A 植物達(dá)瑪烷二醇合酶(DS)ELISA檢測試劑盒

  BS-258251-B 植物達(dá)瑪烷二醇合酶(DS)ELISA檢測試劑盒

  一、實驗原理

  植物達(dá)瑪烷二醇合酶(DS)ELISA試劑盒采用雙抗體夾心法,其核心步驟包括:

  抗體包被:抗DS單克隆抗體預(yù)包被于96孔微孔板,形成固相捕獲層。

  抗原結(jié)合:樣本或標(biāo)準(zhǔn)品中的DS與包被抗體特異性結(jié)合。

  酶聯(lián)檢測:加入HRP標(biāo)記的二抗,形成“抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"復(fù)合物。

  顯色定量:TMB底物催化顯色,終止液作用后于450nm測定吸光度,濃度與OD值正相關(guān)。

  二、試劑盒組成

  組分名稱規(guī)格/濃度保存條件

  預(yù)包被微孔板96孔×1塊2-8℃(干燥)

  DS標(biāo)準(zhǔn)品(凍干)2瓶(0.5-100ng/mL)-20℃(長期)

  生物素標(biāo)記抗體120μL(1:100)-20℃(避光)

  HRP-鏈霉親和素120μL(1:100)-20℃(避光)

  TMB底物溶液10mL2-8℃(避光)

  終止液(2M H?SO?)10mL室溫

  注:所有試劑使用前需平衡至室溫(20-30min) 。

  三、實驗步驟

  樣品處理

  植物組織樣本需研磨后提取總蛋白,離心取上清,用樣本稀釋液稀釋至推薦濃度。

  加樣與孵育

  每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品/樣本,37℃孵育90min。

  洗滌3次(每次200μL洗滌液,靜置30s)。

  檢測與顯色

  加入100μL生物素標(biāo)記抗體,37℃孵育60min。

  洗滌后加入100μL HRP-鏈霉親和素,避光孵育30min。

  加入90μL TMB底物,避光顯色15min,終止后10min內(nèi)讀數(shù)。

  四、數(shù)據(jù)分析

  標(biāo)準(zhǔn)曲線:以標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/mL)為橫坐標(biāo),OD450值為縱坐標(biāo),擬合四參數(shù)邏輯曲線。

  樣本計算:根據(jù)曲線方程計算待測樣本濃度,建議復(fù)孔取平均值。

  五、注意事項

  靈敏度:檢測范圍0.5-100ng/mL,板內(nèi)/板間變異系數(shù)<8%。

  干擾因素:避免樣本反復(fù)凍融或溶血,高脂樣本需離心處理。

  有效期:試劑盒自生產(chǎn)日起6個月內(nèi)使用,部分組分需-20℃保存。

  六、常見問題

  問題現(xiàn)象可能原因解決方案

  標(biāo)準(zhǔn)曲線線性差標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶不充分離心后靜置10min

  顯色過淺孵育時間不足延長顯色至20min

  背景值高洗滌不增加洗滌次數(shù)至5次

  注:以上僅供參考,不作為實際數(shù)據(jù),實驗需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。 Elisa試劑盒

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